茴香醛是小茴香（Cuminumcyminum）的主要活性成分，在多个研究领域表现出抗菌和抗病毒活性。
用于提取茴香醛的茴香籽
在这项研究中，科学家评估了茴香醛对白斑病毒（WSSV）、虾存活率和病毒传播的影响。
一、白斑病对于虾的影响
白斑病是一种虾类传染性病毒性疾病，可在3-10天内导致虾局部死亡，因此被世界动物卫生组织(WOAH)列为应通报病原体。同时，化学品和药品的过度使用，不仅造成对虾产生抗药性，而且造成环境污染，严重威胁人类健康和对虾产业的可持续发展。针对这些问题，开发预防和治疗白斑的新治疗剂刻不容缓。
由于原料丰富、天然安全无毒等优点，草药已成为开发养殖对虾治疗剂的热门选择。研究表明，香豆素（Shanetal.,）等草药在防治白斑方面表现出显着的活性。草药中的有效单体化合物是一种高纯度的物质，具有明确的化学成分和作用机制（Jiangetal.,）。
例如，青蒿素、大黄素、小檗碱、芦荟大黄素等，对提高水产动物的免疫力和抗氧化性能具有重要作用，并具有预防疾病的潜力。
白斑病会导致出现微小的白斑。
茴香醛是小茴香（Cuminumcyminum）的主要活性成分，在多个研究领域表现出抗菌和抗病毒活性。更重要的是，与之前报道的芍药苷和七叶苷相比，茴香醛的分子结构更简单，适合作为抗病毒药物开发的关键化合物。本实验使用长度为0.43±0.09（cm）、体重为4.1±0.2（mg）的虾苗。实验前建立了一系列WSSV浓度（1.6×；1.6×；1.6×；1.6×；1.6×和1.6×拷贝/μL）。
本研究中使用的白斑病毒的终浓度为1.6×拷贝/μL。将感染WSSV的虾组织匀浆，并提取DNA用于qPCR以计算病毒拷贝数。评价标准包括：茴香醛的毒性、茴香醛对虾的抗WSSV活性、茴香醛对WSSV复制的影响、茴香醛对WSSV水平传播的影响、DNA提取和分析、WSSV基因组拷贝数分析。
二、茴香醛对虾的毒性
茴香醛对虾的毒性结果如图1所示。茴香醛浓度低于40μmol/L时对虾无毒，虾的成活率为%。当茴香醛浓度高于40μmol/L时，其毒性随剂量的增加而增加。特别是茴香醛浓度达到μmol/L时具有剧毒，24小时后虾全部死亡。当茴香醛浓度为μmol/L时，48小时后全部虾死亡。结果表明，本实茴香醛的安全浓度为40μmol/L，对虾无毒害作用，可用于后续实验。
图1：0~μmol/L茴香醛72小时对虾苗的毒性
三、茴香醛对抗WSSV的活性
对茴香醛的活性如图2所示。不同浓度的茴香醛均可降低WSSV感染虾的死亡率，茴香醛达到40μmol/L时，72天后病虾的存活率提高了60%（图2A）。与不同浓度茴香醛同时孵育72小时后检测WSSV基因组拷贝数。结果发现，随着对茴香醛浓度的增加，WSSV基因组拷贝数逐渐降低，当浓度为40μmol/L时达到最低水平。在此浓度下，WSSV复制在虾体内受到显着抑制，抑制率为89%（图2B）。结果表明，水中浓度为40μmol/L的茴香醛具有最佳的抗WSSV活性。
图2：茴香醛抗WSSV的活性
用茴香醛孵育3、6和12小时，然后WSSV感染24小时后，虾苗的存活率没有显着差异（图3B）。用茴香醛孵育6小时和12小时的虾，在攻击后48小时表现出较高的存活率，高于预孵育0小时的虾。感染WSSV72小时后，虾的存活率与孵化前的时间呈正相关。预孵化时间为0小时时，虾的成活率为0%，预孵化时间为12小时时，成活率最高，为44%。图3C中的数据显示了用茴香醛预孵育，并用WSSV攻击72小时虾的WSSV基因组拷贝数。结果表明，预孵化不同时间后茴香醛可显着抑制虾体内WSSV的复制，抑制率分别为34%、45%和34%。
图3：茴香醛预孵育虾对WSSV感染的影响
(A)工艺流程图。(B)曲线显示在对茴香醛浓度高达40μmol/L的预孵化处理中分析的WSSV感染虾的存活率。(C)在茴香醛中测试的虾苗中WSSV基因组拷贝数的定量，将虾苗预孵育3、6和12小时，然后进行WSSV感染。
四、茴香醛预孵育WSSV对病毒复制的影响
图4B所示结果表明，WSSV与茴香醛预孵育不同时间，并攻击24小时，对虾的存活没有显着影响。然而，当WSSV与茴香醛预孵育2小时，然后分别攻击48小时和72小时时，虾的存活率显着提高（图4B）。WSSV基因组拷贝数分析表明，茴香醛与WSSV预孵育0.5小时对WSSV在虾体内的复制没有显着影响。当茴香醛与WSSV预孵育1小时和2小时，WSSV在虾体内的复制受到显着抑制，抑制率分别为36%和32%（图4）。这些结果表明茴香醛可能对WSSV病毒颗粒具有潜在作用，可抑制WSSV在虾中的复制。
图4：茴香醛预孵育的WSSV对病毒复制的影响。
(A)工艺流程图。(B)在40μmol/L茴香醛中预孵育0.5、1和2小时后分析的WSSV感染虾的存活曲线。(C)在茴香醛WSSV预孵育0.5、1和2小时，然后感染虾苗中WSSV基因组拷贝数的定量。
五、对虾中茴香醛对WSSV复制的影响
无茴香醛处理对病虾存活率和WSSV复制的影响（如图5B和C）所示，72小时后，未用茴香醛处理的病虾存活率为0%，而使用茴香醛保持在50%以上。值得注意的是，用茴香醛处理的病虾直到小时才死亡（图5B）。对病虾的WSSV基因组拷贝数分析表明，茴香醛处理后24、48和72小时WSSV复制受到显着抑制，抑制率分别为43%、62%和60%（图2，5C）。
茴香醛交换处理对病虾存活率和WSSV复制的影响（如图5D和E所示）。茴香醛交换处理提高了病虾的存活率，小时后存活率仍保持在17%。有趣的是，持续换水含有DMSO也提高了病虾的存活率，72小时后达到33%，直到96小时才死亡。WSSV基因组拷贝数分析表明，茴香醛处理24、48、72和96小时可显着抑制病虾WSSV复制，抑制率分别为36%、59%、65%和56%。更有趣的是，连续换水也抑制了病虾中WSSV的复制（图5C和E）。
六、茴香醛对病毒水平传播的抑制作用
茴香醛对WSSV水平传播的影响如图5所示。结果表明，在水中添加茴香醛可以有效抑制WSSV在虾体内的复制。随着一般孵育时间的延长，茴香醛对虾中WSSV复制的抑制分别为30%、37%和23%（图5B）。结果表明茴香醛在阻止WSSV水平传播方面发挥着重要作用。
图5：茴香醛抑制WSSV水平传播
(A)工艺流程图。(B)每24小时测试一次的虾苗WSSV基因组拷贝数。
综上所述，茴香醛能够显着抑制WSSV的复制，提高对虾的成活率。用茴香醛预处理虾和WSSV可以有效降低虾体内WSSV基因组复制水平。水平传播实验进一步证明了茴香醛在预防和治疗WSSV方面的潜力。因此，茴香醛具有在对虾养殖中广泛应用的潜力。
