白斑综合症杆状病*复合体主要对虾体的造血组织、结缔组织、前后肠的上皮、血细胞、鳃等系统进行感染破坏。患病的对虾在胸腹部常有白色或暗蓝色的斑点,使整个虾体在外观上呈现一种花斑样改变,养殖虾厌食,摄食减少或停止摄食,死虾空胃。行动迟钝,弹跳无力,静卧不动或游动异常(围着他边在水面兜圈或在水中翻滚),这种行为上异常行为可在几小时内重复出现,直到最后无力活动,腹面朝上慢慢沉到水底,或被其他对虾吃掉。
白斑综合症杆状病*复合体既可通过组织学方法与电镜观察进行诊断,也可通过基因核酸探针进行诊断。基因核酸探针操作简便,特异性与敏感性高,并且运用于检测早期感染。这一方法所需要设备简单,对于一般养殖单位、病害防治单位或个人都可进行操作,既经济实用又准确无误,并能在发病前20-40天作出预报,给指导生产者提前做到预防。
关于对虾白斑病的具体测试方法有很多种,现行最新的、权威的是中国人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T.2-,它替代的是SN/T.2-和SN/T.6-,实验室在申请CNAS认可的时候申请的就是这个最新现行有效的标准。
此标准规定了对虾白斑病的PCR,斑点杂交和原位杂交等检测规范。关于PCR具体测试流程如下:
一、关于试剂和设备的部分要求:1.试验用试剂如无特殊说明,均为分析纯试剂,实验用水要符合GB/T一级水的要求;2.无水乙醇:预冷的无水乙醇于-20℃保存,不需预冷的无水乙醇于常温保存。3.恒温培养箱:80℃±1℃(设备的精确度)4.电子天平:感量0.g5.微量移液器:量程0.5μL-μL,6.Taq酶:-20℃保存。
二、测试操作流程
1.采样:受精卵,3㎝以下幼虾,仔虾采集整条作为样本,成虾采集上皮,肝胰腺,肠或腮作为标本,采样数量依据GB/T,匀浆后取样品25mg-mg置于1.5ml离心管中。
2.PCR检测:1.DNA提取:2.套式PCR:(第一次PCR和第二次PCR)3.琼脂糖电泳
3.结果判定。
详细测试规范请参照SN/T.2-。
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